原核蛋白表达服务

德泰生物拥有超十年的蛋白表达经验，已成功交付5000+组蛋白，包括毒性蛋白、生长因子、酶等。主要应用于：作为抗原制备抗体；参与细胞实验与动物实验；测定蛋白酶活；研究蛋白相互作用（免疫共沉淀，GST pull down）；蛋白结晶结构研究，免疫组化实验等，不同的应用对于蛋白的要求也互不相同。在进行蛋白表达时，通常要考虑以下几点：

蛋白本身特性：蛋白的分子量大小，蛋白来源/物种，是否为毒性蛋白，蛋白翻译后修饰程度，蛋白结构复杂程度，在细胞内外的定位等；
蛋白表达系统选择：不同蛋白表达系统有不同的优势，如表达量高低，能否糖基化修饰等，结合蛋白应用并全面考虑，选择最合适的蛋白表达系统；
蛋白需求量：不同下游应用需求量有所区别，制备抗体需2~8mg，常规功能学研究10~200ug，细胞实验或药物研究则需更多；
蛋白纯化标签去留：蛋白纯化标签主要有His，GST，SUMO，MBP等。His标签只有0.84kd，利于纯化且对蛋白无影响，可以保留；其他属于大标签，可以提高蛋白可溶性，但需要切除，否则会影响蛋白结构功能。

服务内容	服务内容	德泰交付	价格
原核蛋白表达	蛋白表达	表达载体 3-5mg,>90%纯度蛋白质检报告项目流程报告	询价
内毒素去除服务（可选）	包括制备过程中内毒素控制及纯化过程中内毒素去除两部分，内毒素水平控制在0.01~1.0 EU/ug	内毒素质检报告
大规模发酵服务（可选）	利用发酵工艺，提供毫克至克级重组蛋白制备，满足大量制备的需求	最终交付客户需求的蛋白量（或菌泥）

实验流程

实验流程	服务特色	周期
密码子优化	自主研发MaxCodon^TM生物信息学软件，对稀有密码子、密码子偏好性等因素进行分析优化（什么是密码子优化？）	~2周
基因合成&载体构建	德泰拥有几十种表达载体：pET系列（pET28a、pET30a、pET43.1 a等），pGEX4T-1、pBAD24、pGADT7、pQE-30等	~2周
表达小试	根据蛋白的性质选择合适的菌株：BL21 (DE3) 、OrigamiB(DE3)、Rosetta(DE3)、BL21 CodonPlus(DE3）、codon Plus(DE3)、ESL等多种表达条件优化，增加可溶性蛋白表达量	1周
放大表达&蛋白纯化	放大表达&纯化，交付您需要的蛋白量四大蛋白纯化方法，先进的AKTA纯化设备，可纯化标签/无标签蛋白	2~3周
蛋白质检	SDS-PAGE、WB检测、质谱检测（可选）	2~3周

原核表达案例

案例为蛋白酶A的制备，该蛋白的制备难点在于：
a. 该蛋白酶自身含有酶切位点，表达很难获得目的蛋白，在前段加入一段非信号肽的前肽，可以抑制蛋白酶A的活性，再通过快速纯化获得；
b. 在纯化过程中需要对该段前肽进行切除，需要低温快速纯化，难度较大；
c. 切除后的蛋白不含有标签，不能用标签亲和纯化，需要利用磁珠对目的蛋白进行纯化。

制备流程

蛋白表达：目的蛋白很难直接表达出来，通过在蛋白序列前段加入一段非信号肽的前肽，使目的蛋白成功表达；
蛋白纯化：采用胰凝乳蛋白酶对加入的前肽进行切除。实验人员对酶切条件进行了多次摸索，包括酶切的时间、胰凝乳蛋白酶浓度、是否需要加抑制剂、抑制剂浓度及抑制时间等（全程共用凝胶34块）。最终找到了合适的酶切条件成功将前肽切除掉。自制磁珠亲和纯化柱，验证可用后利用磁珠亲和纯化柱纯化得到目的蛋白。