抗体亚型的鉴定

亚型指的是相同的构成方式，但是空间结构不同的蛋白质结构。抗体亚型，指的是在机体内产生的“Y”构型的免疫球蛋白（Ig），基于小分子多肽结构上的差异，可以进一步的进行细分。

抗体亚型

重链

抗体以一个或者多个“Y”字形单体存在,每个“Y”字形单体由 4 条多肽链组成,包含两条相同的重链和两条相同的轻链。通常，抗体的种类由重链决定。例如哺乳动物Ig的重链一共有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和 μ 来命名,相对应组成的抗体就称为 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。其中，人的γ可以进一步细分为γ1、γ2、γ3、γ4等亚类，分别对应IgG1, IgG2, IgG3和IgG4四个亚型，小鼠γ可以进一步细分为γ1、γ2a、γ2b、γ3等亚类，分别对应IgG1, IgG2a, IgG2b和 IgG3四个亚型。

轻链

哺乳动物有两种轻链：λ型和κ型。出于科研的需要，人们也会对轻链的亚型进行鉴定。

类/亚类	重链	轻链	分子量（kDa）	结构	功能
IgA1 IgA2	α1 α2	λ或κ	150-600	单体-四聚体	IgA有血清型和分泌型，血清型IgA不显示重要的免疫功能，分泌型IgA存在于分泌液中，如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液等，是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体。
IgD	δ	λ或κ	150	单体	功能不详；与IgM共同存在于B细胞发育的各个阶段；大部分与B细胞结合。
IgE	ε	λ或κ	190	单体	结合变应原引发巨细胞释放组胺，可以对抗寄生虫感染。
IgG1 IgG2 IgG3 IgG4	γ1 γ2 γ3 γ4	λ或κ	150	单体	血清中最主要的免疫球蛋白。在免疫反应中最主要的抵御病原的侵袭的抗体为IgG; 可通过胎盘。
IgM	μ	λ或κ	900	五聚体	最早产生的反应性抗体，在B细胞表面表达，分泌型有很高的亲和力。在B细胞介导的免疫反应早期，产生足够的IgG之前发挥消除病原菌的作用。

表1：不同亚型抗体的结构与功能

抗体亚型鉴定

抗体亚型鉴定的原理是利用酶联免疫吸附实验（ELISA），测定待测抗体与不同亚型特异性的抗体的结合情况，找出可以与待测抗体特异性结合的抗体，由于与待测抗体结合的抗体的特异性都是已知的，依据结合抗体的特异性可以得出待测抗体的亚型。以小鼠抗体亚型的测定为例，利用ELISA测定待测抗体与针对小鼠IgG1、IgG2A、 IgG2B、 IgG3、IgM、λ、κ有特异性的抗体的结合情况。如果待测抗体抗体可以与针对小鼠IgG1的特异性抗体结合（通过肉眼观察颜色深浅或通过测OD值判断），则该抗体的亚型为IgG1。以此类推，也可以测出轻链的亚型。

鉴定方法

目前比较常用的方法是利用试剂盒进行抗体亚型的鉴定，按照试剂盒说明书进行操作，便可以直观的读出抗体的亚型。

利用试剂盒鉴定抗体亚型常见问题与解决方法：

常见问题	可能原因	解决方案
多种重链结果	腹水中有杂抗体	将腹水样本至少 1:100000稀释
	样本中抗体浓度过高	再将样本 1:2-1:10 稀释
	杂交瘤细胞中含有多种细胞系	亚克隆杂交瘤细胞
显色较慢或颜色较弱	样本中抗体浓度低	减少稀释倍数；延长显色时间
结果难以判定	多种重链或轻链结果	再将样本 1:4 或 1:8 稀释后重新检测