细胞转染方法比较

摘要：对哺乳动物细胞转染表达蛋白来说，选择合适的转染方法和转染试剂对转染的成功率起到决定性作用。本文主要列举了瞬时转染和稳定转染的一些方法、原理及适用性，并列举脂质体细胞转染的步骤、注意事项。

细胞转染，是指将外源基因导入细胞内的一种技术。根据哺乳动物细胞蛋白表达流程，细胞培养完成后需进行细胞转染，根据不同的实验目的选择不同的转染方法。目前，常用的细胞转染方法主要分为三类途径：物理介导（电穿孔法，基因枪法、显微注射法）、化学介导（脂质体转染法、磷酸钙共沉淀法、阳离子聚合物介导法）、生物介导（病毒介导转染、原生质体转染）。

理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。目前实验室常用的转染方法有脂质体转染，阳离子聚合物转染和病毒转染，不同的转染方法各有利弊，针对细胞的习性和不同的实验目的选择相对合适的转染方法。下面列举了一些常用转染方法的原理，优缺点和适用性:

细胞转染方法比较

细胞转染方法	细胞转染原理	主要特点
阳离子脂质体转染法	带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA结合形成DNA-脂质体复合物，然后通过细胞的内吞作用进入细胞	a)操作简便 b)适用于各种裸露的DNA和RNA片段 c)适合转染各种的细胞 d)对DNA浓度有一定要求 e)对细胞有一定的毒性	瞬时转染稳定转染所有细胞
阳离子聚合物	带正电的阳离子聚合物与核酸的磷酸基团形成带正电的复合物，复合物和带负电的细胞膜接触，并通过内吞作用进入细胞	与脂质体转染法类似，但是具有很低的毒性，操作简单，适用性广，是新一代转染试剂	瞬时转染稳定转染所有细胞
磷酸钙法	磷酸钙能够促进外源DNA和细胞的结合，磷酸钙-DNA复合物能够附着到细胞表面，并通过内吞作用进入细胞	a)操作简单 b)对DNA浓度要求高 c)适用性有局限（不适用于原代细胞）	瞬时转染稳定转染
电穿孔法	高脉冲的电压破坏细胞膜，在细胞膜表面形成孔道，DNA通过孔道进入细胞	a)适用性广，适用于质粒和几十kb的基因组片段 b)针对不同细胞要优化实验条件 c)细胞致死率较高	瞬时转染稳定转染所有细胞
显微注射法	利用显微操作系统和显微注射技术将DNA直接注入到细胞中	a)整合率较高，适用于工程改造和转基因动物的建立 b)操作复杂，且需要昂贵精密的设备 c)外源基因的整合位点和拷贝数无法控制，会导致片段缺失、突变	瞬时转染稳定转染
逆转录病毒转染	通过病毒的膜蛋白和细胞表面的受体相互作用而进入细胞，利用宿主细胞酶自行转录复制合成DNA，并随机整合到细胞基因组中	a)转染效率高，适用于难转染细胞转染 b)利用病毒介导转染，外源基因整合较稳定 c)逆转录病毒只选择感染分裂细胞 d)容纳外源基因长度<8kb	稳定转染特定细胞转染